• !!!! Отчеты необходимо мне прислать до 14 марта !!!! После меня не будет в городе и стране!!

  • Скачать 229.89 Kb.


    страница1/2
    Дата17.01.2018
    Размер229.89 Kb.
    ТипОтчет

    Скачать 229.89 Kb.

    Лаборатория белки


      1   2

    Лаборатория Химии белка
    Отчет по работе должен состоять из 2х частей. Первая часть касается определения концентрации белков. Вторая – постановке электрофореза и анализе результатов.
    !!!! Отчеты необходимо мне прислать до 14 марта!!!! После меня не будет в городе и стране!!
    У каждого был свой личный номер (N) и 2 своих пробирки.
    N-1 – для определения концентрации

    N-2 – для приготовления пробы для нанесения на гель


    В отчете пишем свой номер и стараемся отвечать на вопросы и давать пояснения по пунктам.
    Часть 1. Определение концентрации белка методом Bradford.


    1. На каких взаимодействиях белка с красителем основам метод?

    2. Что используется для построения калибровочной кривой?

    3. Кратко опишите метод (порядок действий, с указанием объемов, времени, длины волны и т.д.)

    4. Какой объем пробы брали для определения концентрации белка и почему?

    5. Что использовали в качестве контроля?

    6. Какая концентрация белка получилась в конечном варианте? (в исходной пробирке, мкг или мг / мл)

    7. Как вы считаете, можно ли использовать метод для определения концетрации любых типов белков?


    Часть 2. Постановка Диск-электрофореза.
    В материалах с лаборатории выложены сканы с Вашими гелями (покрашенными и отмытыми) + один контрольный гель (ставил уже я) с пробами, которые по каким-либо причинам на гелях оказались не видны.

    Первая и основная задача описать кратко весь порядок действий для постановки ЭФ (включая объемы, силу тока, время, и т.д.) Основная информация есть в презентации.

    Можно разбить все действия на 3 части. 1) Подготовка пробы 2) Сборка и заливка геля 3) Постановка электрофореза 4) Проявка (фиксация, покраска, отмывка)

    В описание своей работы можно влючить сканы форезов с указанием места расположения вашей пробы.
    Вторая дополнительная задача – определить молекулярную массу белка в Вашей пробе и попробовать определить, что это может быть за белок (подсказки я дам в отдельном файле). Также необходимо построить денситограмму и попытаться рассчитать концентрацию белка (в пробе N-2) по ней (как стоить денситограмму написано ниже).
    В конце второй части отчета попытайтесь ответить на несколько вопросов:
    1) Гель с каким % содержанием акриламида использовали и почему?

    2) В случае, если на форезе не видно вашей пробы, попытайтесь объяснить причины.

    3) Какова основная задача такого типа электрофореза?

    4) Какие способы дальнейшего анализа белка возможны после проведения диск-электрофореза (т.е. что еще теоретически можно сделать с данным гелем), если это вообще имеет смысл?

    Для определения молекулярной массы белков на ПААГ мы наносили пробы (маркеры), которые содержали белки с известной молекулярной массой.

    Маркер M1 - Маркер M2 -






    В качестве контролей использовали BSA (bovine serum albumin).
    K1 – 5 мкг.

      1   2

    Коьрта
    Контакты

        Главная страница


    Лаборатория белки

    Скачать 229.89 Kb.