• Дополнительный контрольный гель (ставил я)

  • Скачать 229.89 Kb.


    страница2/2
    Дата17.01.2018
    Размер229.89 Kb.
    ТипОтчет

    Скачать 229.89 Kb.

    Лаборатория белки


    1   2
    K2 – 10 мкг
    Cхемы нанесения проб
    Гель 2
    | X | M2 | X | 4 | 3 | 2 | M1 | K2 | K1 | X |

    ________________________________________


    Гель 3
    | X | M2 | 10 | 7 | 6 | 5 | M1 | K1 | K2 | X |

    ________________________________________


    Гель *
    | X | M2 | X | 9 | 8 | 1 | M1 | K2 | K1 | X |

    ________________________________________


    Дополнительный контрольный гель (ставил я)
    | X | 3 | 9 | 8 | 1 | 10 | 4 | M1 | K1 | X |

    ________________________________________



    Построение денситограмм
    Гели можете попытаться проанализировать с помощью программы ImageGel (http://rsb.info.nih.gov/ij/), которая учитывает интенсивность окраски полос на геле. По ней можно попробовать рассчитать концентрацию белка, нанесенного на электрофорез, исходя из известных концентраций контроля (в нашем случае К1 и К2).

    Для отчета необходимо приложить денситограмму со своей пробой и, у кого, получится, прикинуть, сколько белка в ней содержалось (посчитать площадь пика анализируемого белка и сравнить ее с площадью пика контрольного белка K1 или K2).


    ВНИМАНИЕ: в полученных гелях в каждой дорожке вы можете увидеть несколько полос. ВАШ белок – это как правило самая яркая полоса.
    Для экономии вашего времени вот порядок действий:


    1. Выбираем путь к изображению. Открываем.

    2. Инструментом Rectangular выделяем полоску с маркерными белками (не во всю ширину, желательно посередине дорожки, где-то 1/5 ее ширины). Запоминаем координаты положения выделенной области (по Y)

    3. Нажимаем: analyze  gels  select first lane

    4. Передвигаем прямоугольник на дорожку с вашим белком или контрольным (чтобы по Y совпадало)

    5. Нажимаем analyze  gels  select next lane

    6. Аналогично можно выбрать еще несколько других дорожек

    7. Когда все дорожки учтены, нажимаем: analyze  gels  plot lanes. Получаем денситограмму. Интрументом Wand можно выделить пики и автоматом посчитать площадь выделенной области (появляется новое окно, площадь считается в непонятных единицах :-)

    8. Для точного определения концентрации необходимо, конечно, убрать фон.

    В нашей лаборатории мы редко считаем концентрацию с помощью денситограмм, а используем их для визуализации результатов или сравнения спектра белков в разных пробах. Вот для примера (что может получиться и как это выглядит):


    кДа

    116


    66

    45

    35



    25

    18

    14



    кДа 116 66,2 45 35 25 18,4


    1

    2

    3

    4
    5

    1 2 3 4 5
    1   2

    Коьрта
    Контакты

        Главная страница


    Лаборатория белки

    Скачать 229.89 Kb.